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Exhaustive in vivo labelling of plasmid DNA with BrdU for intracellular detection in non-viral transfection of mammalian cells

Titelangaben

Jérôme, Valérie ; Heider, Andreas ; Schallon, Anja ; Freitag, Ruth:
Exhaustive in vivo labelling of plasmid DNA with BrdU for intracellular detection in non-viral transfection of mammalian cells.
In: Biotechnology Journal. Bd. 4 (2009) Heft 10 . - S. 1479-1487.
ISSN 1860-7314
DOI: https://doi.org/10.1002/biot.200900053

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Abstract

The study of the non-viral gene delivery process at the molecular level, e.g. during the transfection of mammalian cells, is currently limited by the difficulties of specifically detecting the transfected plasmid DNA within the cells. Here we describe the in vivo production of 5-bromodeoxyuridine (BrdU)-labelled plasmid DNA by a thymine-requiring Escherichia coli strain leading to 92 +/- 15% BrdU incorporation while minimizing plasmid structure alteration. The labelled plasmid is produced on the milligram scale in a two-stage cultivation process. The relevance of this approach for plasmid DNA visualisation in the field of gene delivery is demonstrated by localising the BrdU-labelled plasmid DNA via immunodetection/fluorescence microscopy in CHO-K1 cells after electroporation with naked, BrdU-labelled plasmid DNA and after polyfection with polyethylenimine/BrdU-labelled plasmid complexes.

Weitere Angaben

Publikationsform: Artikel in einer Zeitschrift
Begutachteter Beitrag: Ja
Keywords: 5-Bromodeoxyuridine; DNA detection; Gene delivery; In vivo labelling; Transfection
Institutionen der Universität: Fakultäten > Fakultät für Ingenieurwissenschaften
Fakultäten > Fakultät für Ingenieurwissenschaften > Lehrstuhl Bioprozesstechnik
Fakultäten > Fakultät für Ingenieurwissenschaften > Lehrstuhl Bioprozesstechnik > Lehrstuhl Bioprozesstechnik - Univ.-Prof. Dr. Ruth Freitag
Fakultäten
Titel an der UBT entstanden: Ja
Themengebiete aus DDC: 500 Naturwissenschaften und Mathematik
500 Naturwissenschaften und Mathematik > 500 Naturwissenschaften
Eingestellt am: 24 Feb 2016 13:22
Letzte Änderung: 26 Apr 2022 11:19
URI: https://eref.uni-bayreuth.de/id/eprint/31031