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SEAP activity measurement in reporter cell-based assays using BCIP / NBT as substrate

Titelangaben

Jérôme, Valérie ; Freitag, Ruth ; Schüler, Dirk ; Mickoleit, Frank:
SEAP activity measurement in reporter cell-based assays using BCIP / NBT as substrate.
In: Analytical Biochemistry. Bd. 585 (2019) . - 113402.
ISSN 0003-2697
DOI: https://doi.org/10.1016/j.ab.2019.113402

Abstract

SEAP (secreted embryonic alkaline phosphatase) has been suggested as versatile reporter protein inter alia for cell ligand interaction. Generic photometric assay formats for this enzyme are currently lacking. Using the interaction of recombinant hCD40 ligand with HEK-Blue sensor cells expressing the CD40 receptor as example, we show that such an assay can be developed based on BCIP/NBT (5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate/nitroblue tetrazolium chloride) as substrate. Supplementation of the reaction buffer with a micelle-forming detergent (TWEEN 20) stabilizes the water-insoluble reactions products thereby allowing reproducible photometric quantification of the colloidal dispersion. After optimizing the assay in terms of incubation time, cell number and environmental conditions, a cellular response to stimulation was already visible for 0.25 ng mL−1 of rhCD40L. Moreover, the sensitivity of the assay was significantly better than reported previously for alternative assays used in combination with the commercially available reporter cells. The use of BCIP/NBT as substrate therefore provides a robust and sensitive method to monitor SEAP activity in solution, which could conceivably be extended to other cell-based and biological assays using SEAP as reporter protein.

Weitere Angaben

Publikationsform: Artikel in einer Zeitschrift
Begutachteter Beitrag: Ja
Institutionen der Universität: Fakultäten > Fakultät für Biologie, Chemie und Geowissenschaften > Fachgruppe Biologie > Lehrstuhl Mikrobiologie > Lehrstuhl Mikrobiologie - Univ.-Prof. Dr. Dirk Schüler
Fakultäten > Fakultät für Ingenieurwissenschaften > Lehrstuhl Bioprozesstechnik > Lehrstuhl Bioprozesstechnik - Univ.-Prof. Dr. Ruth Freitag
Fakultäten
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Fakultäten > Fakultät für Ingenieurwissenschaften
Fakultäten > Fakultät für Ingenieurwissenschaften > Lehrstuhl Bioprozesstechnik
Titel an der UBT entstanden: Ja
Themengebiete aus DDC: 500 Naturwissenschaften und Mathematik > 500 Naturwissenschaften
500 Naturwissenschaften und Mathematik > 570 Biowissenschaften; Biologie
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften
Eingestellt am: 03 Sep 2019 06:18
Letzte Änderung: 10 Okt 2023 09:28
URI: https://eref.uni-bayreuth.de/id/eprint/52126